GFP標記到表達的煙草葉片為什麼有紅色熒光?
經常有同學谘詢,我用LUYOR-3415RG GFP便攜式雙波長熒光蛋白激發光源觀察GFP才(cai)煙(yan)草(cao)葉(ye)片(pian)的(de)表(biao)達(da),為(wei)什(shen)麼(me)會(hui)有(you)紅(hong)色(se)熒(ying)光(guang),有(you)的(de)是(shi)整(zheng)片(pian)葉(ye)片(pian)都(dou)是(shi)紅(hong)色(se)熒(ying)光(guang),有(you)的(de)有(you)綠(lv)色(se)熒(ying)光(guang)表(biao)達(da),也(ye)有(you)紅(hong)色(se)熒(ying)光(guang),究(jiu)竟(jing)是(shi)什(shen)麼(me)原(yuan)因(yin),現(xian)在(zai),我(wo)們(men)給(gei)大(da)家(jia)解(jie)釋(shi)說(shuo)明(ming)一(yi)下(xia):
因為,煙草葉片含有大量的葉綠素,葉綠素在藍色波段照射時候,會發出紅色熒光。具體葉綠素的激發光和發射光的光譜圖如下:

由上圖可以看出,葉綠素a和葉綠素b的激發波段400-500nm。主峰在460nm,屬於藍光,發射波段為620-680nm,屬於紅光波段。
所以,如果用LUYOR-3415RG照射煙草葉片,如果葉片沒有表達GFP或者GFP表達量太低,會看到整個葉片都是紅色。如果葉片上有很高的GFP表達,在葉片表達的位置會有綠色熒光。見下圖:

如果您不希望看到葉綠素紅色熒光,您可以選擇LUV-30AG綠色觀察眼鏡,這款熒光蛋白觀察眼鏡采用帶通隔離,能夠隔離500nm以下和580nm以上的波段,這樣就看不到葉綠素的紅色熒光。拍照可以選擇LUV-520A拍照濾鏡,這款拍照濾鏡,也是采用帶通濾光片,有效隔離掉了葉綠素的紅色熒光,您可以參考閱讀《如果選購熒光蛋白拍照濾鏡 》LUV-30AG和luv-520a的觀察、拍照效果如下:

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