熒光顯微鏡常用LED激發光源特點
相對於一般的顯微鏡,熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)保(bao)留(liu)著(zhe)顯(xian)微(wei)鏡(jing)功(gong)能(neng)的(de)同(tong)時(shi),還(hai)能(neng)進(jin)行(xing)熒(ying)光(guang)觀(guan)察(cha),具(ju)有(you)檢(jian)出(chu)能(neng)力(li)強(qiang),能(neng)進(jin)行(xing)多(duo)重(zhong)著(zhe)色(se)觀(guan)察(cha)的(de)特(te)點(dian),廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)於(yu)生(sheng)物(wu)醫(yi)學(xue)領(ling)域(yu)。而(er)熒(ying)光(guang)照(zhao)明(ming)光(guang)源(yuan)是(shi)熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)的(de)關(guan)鍵(jian)部(bu)件(jian),作(zuo)用(yong)至(zhi)關(guan)重(zhong)要(yao),既(ji)要(yao)考(kao)慮(lv)檢(jian)測(ce)樣(yang)本(ben)標(biao)記(ji)的(de)熒(ying)光(guang)探(tan)針(zhen)吸(xi)收(shou)光(guang)譜(pu),同(tong)時(shi)又(you)要(yao)考(kao)慮(lv)儀(yi)器(qi)的(de)使(shi)用(yong)簡(jian)便(bian)性(xing)。
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在LED前,熒光顯微鏡常用光源為高壓汞燈,在LED激發光源普遍後,就成為熒光顯微鏡的主要光源。LED發射的單色光位於相對較窄的光譜帶中,半高寬約為10nm-40nm,相對於高壓汞燈,LED激發光源有幾個重要優勢:
1)額定使用壽命可達3000小時以上,遠遠超過其他光源;
2)整個額定使用壽命期間,其輸出強度保持相對穩定,確保高效激發;
3)LED啟動和關閉時間短,即開即用,不需要預熱;
4)LED光效高,且亮度連續可調;
5)體積小、輕便,且為冷光源,彌補汞燈的大功率、發熱、使用複雜燈問題,大大的降低了熒光顯微鏡使用成本並提高熒光顯微鏡操作的簡便性。

對於熒光顯微鏡來說,尤其是單色激發的熒光顯微鏡,LED具有非常大的吸引力,例如B波段激發的熒光探針FLTC/GFP標記的樣板,在藍光LED激發下了可以獲得非常好的圖像,而廣泛應用於免疫熒光檢測領域。上海峰誌多波段LED顯微鏡熒光激發光源,多波段LED光源可選,並可控製每一個LED的亮度,可以實現多波長的選擇激發,便捷、高效。
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熒光顯微鏡分析中常用激發光源的種類
在熒光分析中常用汞燈作激發光源,根據汞蒸氣壓的不同可分為:
低壓汞燈
汞蒸氣,可發射出很強波長的射線,壽命很長,可長時間連續工作,射線對眼睛有害,不眼睛時不可長時間注視。
高壓汞燈
高壓汞燈又叫高強度紫外線燈,汞蒸氣為1-數個大氣壓,可見炮區的譜線增強,在紫外光區,波長為365nm的光線zui強。
中壓汞燈
可以發射一係列汞線組成的不連續光譜,除254nm波長以外,多數譜線都可作為校正波長使用。此外,還有超高壓汞燈、汞-氙燈、汞-鋅燈等。
氫灑和氘燈
是燈泡中加氫蒸氣,經閉合放電產生160-350nm波長的光,氫朋激發態返回的基態時,就發射了氫的連續光譜,在160nm以下為線樂譜,氫燈和氘燈性能相同,其壽命也比氫燈長,因玻璃吸收紫外
線,故燈殼要用石英製作,或在燈泡出光處開一石英窗,此光源適用於紫外光區的測定。
氙燈
紫外線燈的光的輻射能強度很高,它可在220-1100nm之zhi間jian發fa射she很hen強qiang的de連lian續xu光guang譜pu,可ke用yong於yu紫zi外wai區qu,可ke見jian光guang及ji近jin紅hong外wai區qu的de測ce定ding,雖sui其qi輻fu射she範fan圍wei廣guang,使shi用yong中zhong在zai生sheng產chan高gao熱re的de同tong晨chen有you臭chou氧yang味wei,其qi壽shou命ming短duan,燈deng泡pao內nei壓ya較jiao大da,如ru日ri立li牌pai650-60型熒光分光光度計,氙燈平時約有7個大氣壓,點燃後可達30個大氣壓,故使用進應注意。
1、按裝緊固螺絲時用力應均勻,勿成扭力,以免燈泡破裂爆炸。
2、勿用手觸及燈泡,以防受熱不均破裂。
3、如紫外線燈泡有油汙,應用雞皮藮酒精輕擦,不能用布、棉花等物擦拭。
熒光顯微鏡激發熒光的方式有哪些
熒光顯微鏡是科研、病理、jianyandengbumenchangyongdeyiyongguangxueyiqizhiyi。yinweiputongdexianweijingshizaimingliangdebeijingshangguanchaanwu,eryingguangxianweijingshizaianbeijingxiaguanchacaisedetuxiang,yincitabiputongdexianweijingfenbianlitigao100倍bei,可ke以yi觀guan察cha到dao普pu通tong顯xian微wei鏡jing看kan不bu到dao的de細xi節jie。但dan是shi它ta的de調tiao整zheng,校xiao正zheng難nan度du較jiao高gao,隻zhi要yao解jie決jue了le熒ying光guang顯xian微wei鏡jing的de問wen題ti,其qi它ta顯xian微wei鏡jing問wen題ti就jiu迎ying刃ren而er解jie。
激發光源是熒光顯微鏡主要組成部分,熒光顯微鏡都采用200W的(de)超(chao)高(gao)壓(ya)汞(gong)燈(deng)作(zuo)激(ji)發(fa)光(guang)源(yuan)。它(ta)是(shi)由(you)石(shi)英(ying)玻(bo)璃(li)製(zhi)作(zuo),中(zhong)間(jian)呈(cheng)球(qiu)形(xing),內(nei)充(chong)有(you)一(yi)定(ding)量(liang)的(de)汞(gong),工(gong)作(zuo)時(shi)在(zai)兩(liang)極(ji)間(jian)放(fang)電(dian),引(yin)起(qi)水(shui)銀(yin)蒸(zheng)發(fa),球(qiu)內(nei)氣(qi)壓(ya)迅(xun)速(su)升(sheng)高(gao),當(dang)水(shui)銀(yin)完(wan)全(quan)蒸(zheng)發(fa)時(shi),可(ke)達(da)50~70個標準大氣壓力,這一過程一般約5~15min。超(chao)高(gao)壓(ya)汞(gong)燈(deng)的(de)發(fa)光(guang)是(shi)電(dian)極(ji)間(jian)放(fang)電(dian)使(shi)水(shui)銀(yin)分(fen)子(zi)在(zai)不(bu)斷(duan)解(jie)離(li)和(he)還(hai)原(yuan)過(guo)程(cheng)中(zhong)發(fa)射(she)光(guang)量(liang)子(zi)的(de)結(jie)果(guo)。它(ta)發(fa)射(she)很(hen)強(qiang)的(de)紫(zi)光(guang),足(zu)以(yi)激(ji)發(fa)各(ge)類(lei)熒(ying)光(guang)物(wu)質(zhi),因(yin)此(ci)被(bei)熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)普(pu)遍(bian)采(cai)用(yong)。
熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學的基本工具。它是由超高壓光源、濾片係統(包括激發和壓製濾板)、光學係統和攝影係統等主要部件組成,是利用一定波長的光激發標本發射熒光。
熒光顯微鏡激發熒光的方式:
按光的波長範圍分為UV激發法(使用紫外線照明法)和BV激發法(使用藍紫光)兩種。
UV激發法是用短於400nm紫(zi)外(wai)光(guang)進(jin)行(xing)激(ji)發(fa)。該(gai)法(fa)不(bu)存(cun)在(zai)可(ke)見(jian)的(de)激(ji)發(fa)光(guang),所(suo)以(yi)被(bei)觀(guan)察(cha)的(de)熒(ying)光(guang)呈(cheng)現(xian)該(gai)染(ran)料(liao)固(gu)有(you)的(de)熒(ying)光(guang),容(rong)易(yi)判(pan)別(bie)標(biao)本(ben)上(shang)的(de)特(te)異(yi)熒(ying)光(guang)和(he)背(bei)景(jing)組(zu)織(zhi)的(de)自(zi)身(shen)熒(ying)光(guang)。
BV激發法是以404nm、434nm為wei中zhong心xin的de由you紫zi外wai至zhi藍lan光guang進jin行xing激ji發fa。該gai方fang法fa使shi用yong藍lan光guang照zhao射she標biao本ben,所suo以yi熒ying光guang顯xian微wei鏡jing的de截jie止zhi濾lv光guang片pian必bi須xu使shi用yong可ke完wan全quan阻zu斷duan藍lan光guang並bing可ke充chong分fen通tong過guo所suo需xu綠lv、黃熒光的濾光片。用於熒光抗體法的熒光色素。對於激發光的極大吸收波長和熒光的極大發光波長比較接近,所以BVjifafashiyongdelvguangpianbixushiyongruijiezhishilvguangpian。gaifakeyonglanguangzuoweijifaguang,suoyiyingguangsesudexishouxiaolvjiaogao,kededaojiaomingliangdetuxiang。qiquedianshi500nm以下的熒光無法看到,而500nm以上的使整個圖像顯黃色。在熒光抗體法中,大多以熒光色素特有的顏色來判斷其特異性,所以在討論微妙的特異性時,上述BV激發法的缺點往往影響極大。
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