使用XX-15C紫外線燈來進行菌種誘變育種
美國路陽公司生產的XX-15C台式紫外線燈,安裝有2根15w 254nm,鏡麵鋁合金反光板,隔板可調台式支架,是實驗室紫外照射的便捷工具。
波長254nm的紫外線,正好是食用菌遺傳變異物質一核酸的吸收髙峰,菌種細胞即使受到紫外線的輕度照射,也會使遺傳物質一一脫氧核糖核酸(DNA)發生巨大的變化。 常見的變化有:DNA鍵的斷麵,氫鍵飭斷裂,嘧啶的水合化, 胸腺嘧啶二聚體的形成,八分乇內和分子間的交聯等。 所以,紫外線是誘導食用菌,其它擀生物菌種發生變異的誘變劑,在誘變的基礎上,就可能選育出優良的菌種來。
用XX-15C台式紫外線燈進行紫外線誘變育種,首先應準備孢子懸浮液。將新鮮食用菌無菌孢子移入5毫升無菌生理食鹽水(經滅菌處理 的0.9%溶液),或磷酸緩衝溶液(由15克磷酸氫二鈉和2克磷酸二氫鉀共溶於1000亳升經滅菌而得的蒸餾水)中,搖勻後即成孢子懸浮液,萁濃度以每毫升含孢子100萬至1億 個為宜。
誘變時,在暗室內開啟XX-15C台式紫外線燈,調整紫外線燈台式支架的隔板高度。開始先開燈20分鍾,波長穩定後取5亳升孢子懸浮液 倒入直徑6厘米的無菌培養皿中,揭開皿蓋,搖動培養皿, 使照射均勻,照射時間0.5—1.0分鍾,照射後的抱子懸浮液每毫升含活孢子數在10—1000萬個之間。要得到單菌落,得 先用無菌水樣釋至每亳升10—100個,再取稀釋液0.2毫升, 塗布於裝有瓊脂的培養皿上,在25℃溫度下培育5—10天, 待菌落出現後,選純正、健壯的單菌落移入斜麵試管培養, 並做拮抗試驗。
拮抗試驗是取處理和未處理的菌絲各一塊,接在同一斜麵上,相距1 一2厘米,如處理後的孢子已發生變異,其菌絲與未處理的菌絲在相接處就會發生拮抗,形成一條明顯的拮抗線;若未發生變異,則兩方麵的菌絲相連接成一體。
XX-15C台式紫外線燈支架有多個檔位可以調節,方便老師做不同距離、不同強度的紫外線誘變照射實驗
美國路陽 XX-15A/XX-20A/XX-40AA實驗室用紫外線燈
文章轉自:http://www.luyor.cn/news/case/560.html
紫外交聯儀UCL-3500用做紫外誘變箱,紫外誘變儀
紫外誘變育種的原理是什麼?
誘變育種決定生物遺傳物質DNA的吸收光譜(200-300nm)處於紫外線光譜中。當生物的DNA吸收紫外線後,分子機構發生很大變化,這種變化可能會導致DNA遺(yi)傳(chuan)性(xing)大(da)幅(fu)度(du)的(de)改(gai)變(bian),並(bing)在(zai)多(duo)數(shu)情(qing)況(kuang)下(xia)因(yin)為(wei)這(zhe)種(zhong)改(gai)變(bian)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)無(wu)法(fa)正(zheng)常(chang)繁(fan)殖(zhi)和(he)代(dai)謝(xie)而(er)在(zai)短(duan)期(qi)內(nei)死(si)亡(wang),但(dan)少(shao)量(liang)存(cun)活(huo)細(xi)胞(bao)中(zhong)包(bao)含(han)的(de)基(ji)因(yin)突(tu)變(bian)並(bing)具(ju)有(you)一(yi)定(ding)的(de)存(cun)活(huo)能(neng)力(li),提(ti)取(qu)這(zhe)些(xie)細(xi)胞(bao)經(jing)過(guo)一(yi)段(duan)的(de)培(pei)養(yang),可(ke)以(yi)選(xuan)擇(ze)出(chu)有(you)益(yi)的(de)變(bian)異(yi)株(zhu)加(jia)以(yi)擴(kuo)大(da)培(pei)養(yang),從(cong)而(er)得(de)到(dao)希(xi)望(wang)的(de)品(pin)種(zhong)。
用哪個波段紫外線進行紫外誘變育種?
紫外交聯儀UCL-3500內置了6根254nm紫外線燈管,紫外輻照均勻,可以根據自己需要設定輻照時間,也可以根據能量設置輻照能量值。
紫外誘變育種能量是多少?
因不同細胞的吸收能量不同,照射能量由實際育種要求而定,通常,需要控製發生突變的且能存活下來的比例在10-50%即可。
微生物育種的目的就是要人為地使某些代謝產物過量積累,把生物合成的代謝途徑朝人們所希望的方向加以引導,或者促使細胞內發生基因的重新組合優化遺傳性狀,獲得所需要的高產、優質和低耗的菌種。誘變和篩選則是微生物育種的兩個主要環節。
育種可分為自發性突變育種和誘發突變育種。但是自發突變的頻率很低,一般在 10 -6 ~10 -10 ,而誘變育種頻率較高。誘變育種就是利用物理和化學誘變劑處理均勻分散的微生物細胞群,大幅度提高突變頻率,然後設法采用簡便、快速和高效的篩選方法,從中挑選少數符合育種目的的突變株。誘變育種除能提高產量外,還可達到改進產品質量、擴大品種和簡化生產工藝等目的,是目前廣泛使用的育種手段。
誘變育種主要通過物理誘變劑(如:紫外線、X-射線、γ-射線、快中子、激光、超聲波等)和化學誘變劑(如亞硝酸、硫酸二乙酯、亞硝基胍、吖啶類染料等)處理微生物群體細胞,通過合理的篩選程序和方法,從中選出遺傳物質分子結構發生改變的少數細胞。常利用形態突變型、生化突變型、tiaojianzhisitubianxinghezhisitubianxingjinxingchushaierhuodeyouliangxingzhuangdetubianzhu。youbianyuzhongfangfajianbian,rongyizhangwo,rengshimuqianxingzhiyouxiaodeyizhongzhongyaoyuzhongshouduan,danzijiaoxing、方向性差。
物(wu)理(li)誘(you)變(bian)因(yin)子(zi)中(zhong)以(yi)紫(zi)外(wai)線(xian)輻(fu)射(she)的(de)使(shi)用(yong)為(wei)普(pu)遍(bian),其(qi)他(ta)物(wu)理(li)誘(you)變(bian)因(yin)子(zi)則(ze)受(shou)設(she)備(bei)條(tiao)件(jian)的(de)限(xian)製(zhi),難(nan)以(yi)普(pu)及(ji)。一(yi)般(ban)用(yong)於(yu)誘(you)變(bian)育(yu)種(zhong)的(de)物(wu)理(li)因(yin)子(zi)有(you)快(kuai)中(zhong)子(zi)、60Co、γ-射線和高能電子流β-射she線xian等deng。紫zi外wai線xian作zuo為wei物wu理li誘you變bian因yin子zi用yong於yu工gong業ye微wei生sheng物wu菌jun種zhong的de誘you變bian處chu理li具ju有you悠you久jiu的de曆li史shi,盡jin管guan幾ji十shi年nian來lai各ge種zhong新xin的de誘you變bian劑ji不bu斷duan出chu現xian和he被bei應ying用yong於yu誘you變bian育yu種zhong,但dan到dao目mu前qian為wei止zhi,對dui於yu經jing誘you變bian處chu理li後hou得de到dao的de高gao單dan位wei抗kang生sheng素su產chan生sheng菌jun種zhong中zhong,有you80%左右是通過紫外線誘變後經篩選而獲得的。因此,對於微生物菌種選育工作者來說,紫外線作為誘變因子還是應該首先考慮的。
紫外線可以引起的 DNA 損傷,可使同鏈 DNA dexianglinmidingjianxingchenggongjiajiehedexiongxianmidingerjuti,erjutidechuxianhuijianruoshuanglianjianqingjiandezuoyong,bingyinqishuanglianjiegoufashengniuqubianxing,zuaijianjijiandezhengchangpeidui,congerkenengyinqitubianhuosiwang。
在傳統的物理誘手段中,紫外線誘變由於有設備簡單,誘變效率高,操cao作zuo安an全quan簡jian便bian等deng特te點dian而er被bei廣guang泛fan應ying用yong。經jing大da量liang實shi驗yan證zheng明ming利li用yong紫zi外wai誘you變bian的de方fang法fa能neng選xuan育yu出chu大da量liang產chan量liang高gao,活huo性xing強qiang的de優you良liang微wei生sheng物wu菌jun種zhong。本ben實shi驗yan將jiang利li用yong紫zi外wai誘you變bian法fa,篩shai選xuan出chu利li福fu平ping抗kang性xing更geng高gao的de菌jun株zhu。





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